НЕКОТОРЫЕ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПАРОДОНТИТЕ У КРОЛИКОВ Плескановская С.А.,Оразалиева А.М.,Джумаев Х.,Оразалиев А.С.

Государственный медицинский университет Туркменистана


Номер: 3-3
Год: 2017
Страницы: 35-40
Журнал: Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук

Ключевые слова

эспериментадбный пародонтит кроликов, лейкоциты крови, активность миелопероксидазы циркулирующих нейтрофилов, rabbits’ experimental periodontitis, blood leucocytes content, circulating neutrophils’ myeloperoxidase activity

Научная статья

Аннотация к статье

В статье приводятся результаты исследования клеточного состава периферической крови и активности миелопероксидазы в циркулирующих нейтрофилах кроликов при экспериментальном пародонтите.

Текст научной статьи

Пародонтит - тяжелейшее поражение тканей пародонта и одна из важнейших причин потери зубов. По оценке Всемирной организации здравоохранения пародонтитом страдает около половины всего взрослого населения планеты [5, 18,19,25]. И это страшно, если учесть, что пародонтит долгое время протекает скрыто и проявляется внезапно [28]. К этиологическим факторам пародонтита относятся - вторжение или активация уже имеющейся в полости рта бактериальной флоры [14]. Пародонтит довольно часто сопутствует беременности, атеросклерозу, хроническим заболеваниям внутренних органов [38]. Роль состояния иммунной системы в развитии болезней пародонта все более привлекает к себе внимание исследователей [23, 24, 33, 40]. В настоящее время роль иммунной системы в патогенезе острого аутоагрессивного периодонтита уже не вызывает сомнений [4, 8, 9, 12]. Миелопероксидаза (МПО) - один из ведущих ферментов «респираторного взрыва» и один из манифестантов иммунодефицитных состояний. В организме человека пероксидаза обнаружена в лейкоцитах, тромбоцитах, в молоке, а также в тканях, в которых происходит метаболизм эйкозаноидов. В нейтрофилах пероксидаза локализуется преимущественно в специфической зернистости цитоплазмы гранулоцитов, в так называемых азурофильных гранулах. Степень ее активности отражает бактерицидные потенции нейтрофилов [31]. МПО является мощным ауто- и паракринным стимулятором активности нейтрофилов. Это свойство не зависит от каталитической активности фермента, но реализуется через модуляцию внутриклеточной сигнальной системы нейтрофила путем связывания с интегрином CD11b/CD18, тем самым провоцируя дегрануляцию. Поскольку интегрин CD11b/CD18 экспрессирован на мембране моноцитов и натуральных киллеров, можно говорить о способности МПО нейтрофилов модулировать активность указанных субпопуляций лейкоцитов и работать как типичный провоспа-лительный цитокин [7]. Следовательно, снижение активности МПО в нейтрофилах в известной степени является манифестантом снижения активности NK, моноцитов и иммунной системы в целом. В клинической практике снижение активности МПО в нейтрофилах описано при большом числе заболеваний человека и животных независимо от локализации процесса и этиологического фактора. Например, при острых панкреатитах [39], гнойно-воспалительных процессах [3], тяжелых инфекциях уринарного тракта [6], ишемической болезни миокарда [16], кожном лейшманиозе [34], ВИЧ-инфекции [37]. Для всех приведенных патологий характерна дефицитность иммунной системы. В стоматологической практике определение активности МПО в нейтрофилах крови и десневой жидкости становится все более популярным. Cнижение активности МПО в нейтрофилах крови выявлено при патологии пародонта у больных железодефицитной анемией [38], в нейтрофилах десневой жидкости при агрессивном периодонтите [22,26]. Авторы считают определение активности МПО в десневой жидкости одним из важнейших диагностических критериев оценки состояния пародонта. Однако активность МПО нейтрофилов, равно как динамика численности различных субпопуляций циркулирующих лейкоцитов (нейтрофилов и лимфоцитов) крови при экспериментальных поражениях пародонта практически не изучена. Вопрос экспериментального моделирования пародонтита стоит довольно остро. Определенные аспекты этой патологии моделируются на различных животных - крысах [2,14], хомяках, собаках, мини свиньях [11], свиньях [17,20,21], приматах и кроликах [1,16]. Идеальной модели пародонтита, достаточно приближенной к патологии у человека, пока не создано [29]. Тем не менее, моделирование патологии пародонта необходимо для получения более точного представления о патогенезе этого тяжелого заболевания, для разработки новых эффективных способов его лечения и профилактики. Целью настоящего исследования являлось изучение динамики лейкоцитарного состава периферической крови, соотношения ее поли- и моно-нуклеаров, активности МПО нейтрофилов при экспериментальном пародонтите у кроликов. Материалы и методы. Исследования проведены на 20 кроликах породы шиншилла обоего пола массой тела не менее 2-2,5 кг. Животных содержали на обычном рационе питания вивария. Экспериментальный пародонтит воспроизводили путем ежедневных инъекций 0.2 мл гидрокортизона (Гидрокортизона ацетат, суспензия для инъекций 2,5%) в промежуток между резцами нижней челюсти до проявления выраженной клиники пародонтита. Животных осматривали ежедневно, обращая внимание на общую подвижность, аппетит, массу тела, выделения из носа, слюнотечение, подвижность нижних резцов. На 3-7-14- 21 и 30 стуки введения гидрокортизона (ГК) из центральной вены уха забирали кровь при помощи вакутайнеров. Из полученной крови готовили мазки на предметных стеклах для подсчета лейкоформулы и определения активности миелопероксидазы (МПО). Подсчет лейкоформулы (ЛФ) осуществляли традиционным способом на мазках, окрашенных гематоксилинэозином. По результатам подсчета ЛФ вычисляли величину гранулоцитарного индекса (ГИ), представляющего собой отношение суммы всех циркулирующих гранулоцитов на сумму циркулирующих мононуклеаров [36]. Активность МПО в нейтрофилах крови выявляли цитохимическим способом. Результаты реакции выражали в % МПО-положительных нейтрофилов (ПОн), а так же вычисляли средний цитохимический коэффициент (СЦКпо) по Астальди [30]. Полученные результаты обработаны на ПК при помощи программы SPSS. Результаты исследования и их обсуждение. Исследования показали, что на 13-15 сутки (в среднем 14,7±1,2) ежедневного введения ГК в десну кроликов между резцами нижней челюсти приводит к развитию клиники пародонтита, которая выражается отеком и гиперемией слизистой, обильными гнойно-фибринозными наложениями у корня, с постепенно нарастающим расшатыванием зубов, обильными слизистыми выделениями из носа. С 6-7 суток от начала эксперимента наблюдается постепенная потеря массы тела, которая к моменту выраженной клиники в среднем составляет 400,7±25,3 г по сравнению с исходной массой тела животных. По мере прогрессирования клинических проявлений пародонтита в периферической крови животных снижается численность гранулоцитов, что отражается на величине ГИ. Величина ГИ прогрессивно снижается и уже к 7 суткам от момента введения ГК различие по отношению к исходной величине становится достоверным (p<0,05). Минимальным значение ГИ становится на 13 - 16 сутки (рис.1) и составляет на пике клиники 0,62±0,05 против исходного 1,29±0,07 (p<0,01). При дальнейшем наблюдении (до 30 суток) величина ГИ несколько увеличивается, но остается ниже исходного уровня (p<0,05). Это обстоятельство заинтересовало нас в контексте несоответствия снижения величины ГИ при наличии воспалительного процесса в ткани пародонта кроликов, поскольку ранее нами было показано, что при всех альтеративно - воспалительных процессах у человека независимо от локализации величина ГИ прогрессивно увеличивается и точно отражает степень повреждения ткани [35]. Однако есть данные об отсутствии накопления гранулоцитов в ткани пародонта при экспериментальном пародонтите у кроликов [11,32]. Поскольку моделирование пародонтита на кроликах осуществляется при помощи инъекций гидрокортизона, мы допускаем, что препарат вызывает общую недостаточность иммунной системы, одним из признаков которой, как известно, является агранулоцитоз [31]. Дефицитность иммунной системы способствует вторжению болезнетворной флоры в ткань пародонта, что вполне соответствует современных представлениям о патогенезе этого заболевания [9,11,12,13,32]. Следовательно, величина ГИ отражает как степень поражения пародонта кроликов в ответ на введение ГК, так и динамику развития вторичной недостаточности иммунной системы животных. На наш взгляд, величина ГИ может быть использована как индикатор (биомаркер) развития пародонтита. Было установлено, что по мере прогрессирования клиники пародонтита снижается не только численность циркулирующих гранулоцитов, но и процент нейтрофилов, дающих положительную реакцию на миелопероксидазу (ПОн). Рис. 1. Динамика значений ГИ у кроликов при экспериментальном пародонтите Одновременно снижается и СЦК фермента. Динамика изменений представлена на диаграмме (рис.2), из которой видно, что уже на 7 сутки от начала введения ГК как процент ПОн, так и СЦК фермента довольно значительно снижаются. При этом процент ПОн составляет 90,7±1,9 против 95,8±2,1% до введения ГК; значения СЦКпо составляют - 1 ,1±0,03 против исходного 1,45±0,05 (p<0,05 и <0,01 соответственно). Рис.3. Динамика численности МПОн и значений СЦКмпо при экспериментальном пародонтите у кроликов Снижение СЦКпо происходит за счет снижения процента нейтрофилов с высокой активностью фермента, оцениваемую в ++ и +++ (рис.3. В и С ), и накоплением клеток с отрицательной реакцией на МПО (рис. 3 A). Минимальные значения показателей (процента ПОн и СЦКпо) приходятся на период разгара клиники. Наши данные соответствуют данным литературы о резком снижении активности МПО при патологии пародонта у человека [38]. А В C D Рис.3. Нейтрофилы крови различной степени активности при экспериментальном пародонтите у кроликов. А - отрицательная реакция на МПО, В- положительная реакция на ++ , С- положительная реакция на +++, D - дегрануляция нейтрофила. С 13-15 суток от начала введения ГК в мазках крови кроликов резко увеличивается число дегранулировавших нейтрофилов (рис.3, С). Их число достигает 5,3±0,3 против 1,4±0,1 % до введения ГК (p<0,001). На фото D (рис.3) заметно, что окружающие дегранулировавший нейтрофил эритроциты дают слабоположительную реакцию на МПО, что указывает на освобождение МПО и эластазы [27]. Таким образом, выраженный воспалительный процесс в тканях пародонта кроликов сопровождается интенсификацией процессов дегрануляции нейтрофилов. Следовательно, определение активности МПО в нейтрофилах крови справедливо предложено в качестве диагностического и прогностического теста при аутоагрессивном пародонтите у человека [12]. Полученные нами данные, в известной степени, позволяют говорить о достаточном соответствии характера и степени изменения функциональной активности циркулирующих нейтрофилов у кроликов при экспериментальном пародонтите, изменениям у больных пародонтитом. МПО - один из компонентов кислородзависимой антибактериальной системы нейтрофилов. Дефицит фермента является одним из основных факторов, способствующих инвазии патогенных микроорганизмов в пародонт [8,10]. В этой связи мы допускаем возможность использования определения активности МПО и численности дегранулировавших нейтрофилов в качестве критериев развития экспериментального гидрокортизонового пародонтита у кроликов. Таким образом, при экспериментальном пародонтите у кроликов, вызванном введением гидрокортизона, развивается своеобразная гематологическая реакция, свойственная иммунодефицитному состоянию у млекопитающих. В частности, изменением соотношения поли- и моно-нуклеаров в периферической крови, снижением численности нейтрофилов, дающих положительную цитохимическую реакцию на миелопероксидазу, увеличением численности дегранулировавших нейтрофилов. Выводы. 1. При экспериментальном гидрокортизоновом пародонтите у кроликов развивается типичная для иммунодефицитного состояния реакция со стороны крови, выражающаяся умеренным агранулоцитозом и снижением активности МПО в нейтрофилах крови. 2. Полученные данные указывает на необходимость коррекции функциональной активности иммунной системы при пародонтитах. 3. Полученные данные позволяют рассматривать гидрокортизоновую модель пародонтита у кроликов, как полезную при изучении иммуно-гематологических характеристик данной патологии, а так же как удобную модель для разработки средств и методов лечения пародонтита иммунотропными препаратами.

 

(c) Архив публикаций научного журнала. Полное или частичное копирование материалов сайта возможно только с письменного разрешения администрации, а также с указанием прямой активной ссылки на источник.