ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ Karvachar-1 ИЗ ГОРЯЧЕГО ИСТОЧНИКА КАРВАЧАР Сагателян А.Р.,Маргарян А.А.,Паносян О.А.,Трчунян А.А.

Ереванский государственный университет


Номер: 6-1
Год: 2014
Страницы: 89-92
Журнал: Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук

Ключевые слова

Thermus scotoductus, 16S рДНК, геотермальный источник Карвачар, Thermus scotoductus, 16SrDNA, Karvachar geothermal spring

Просмотр статьи

⛔️ (обновите страницу, если статья не отобразилась)

Аннотация к статье

Статья посвящена выделению и изучению облигатно-термофильных aспорoгенных бактерий из геотермального источника Карвачар. Выделен штамм названный Karvachar-1 и на основании фенотипических и генотипических признаков идентифицирован как Thermus scotoductus.

Текст научной статьи

В природе термофильные aспорoгенные микроорганизмы, которые растут при относительно высоких температурах представляют экологически обособленную группу [6]. Среди них представители рода Thermus, являющиеся активными продуцентами термозим [1], часто выделяются из наземных и морских геотермальных источников [5]. На территории Армении и Нагорного Карабаха обнаружены многочисленные наземные геотермальные источники [10], микробиота которых представляет уникальный природный резервуар для получения новых биотехнологических ресурсов. В настоящее время довольно детально изучено таксономическое разнообразие термофильных аэробных эндоспорообразующих бактерий этих геотермальных источников [2]. При этом, облигатно-термофильные aспорoгенные бактери, в том числе представители рода Thermus в этих источниках мало изучены. Целью исследования являлось выделение и идентификация облигатно-термофильных aспорoгенных бактерий из геотермального источника Карвачар (Нагорный Карабах). Материалы и методы Для выделения термофильных бактерий источником служили образцы ила отобранные из горячего источника Карвачар (N 40°17.417′, E 46°27.500′, pH 7.3, T 70°C). Выделение облигатно-термофильных бактерий осуществлялось методом накопительных культур и прямого высева разведенного образца на специальную питательную среду для получения культур Thermus sp. [12]. Инкубация культур проводилась при 65 и 70°C. Чистую культуру выделяли путем посева на чашки Петри с той же средой, содержащей 3% агара. Изучение некоторых морфокультуральных и физиолого-биохимических особенностей осуществляли по методам Kalab et al. и Pěčková [3; 4]. Чувствительность культуры к антибиотикам определяли с помощью готовых бумажных дисков, пропитанных определенными антибиотиками (пенициллин, ампициллин, гентамицин, эритромицин, канамицин, стрептомицин). Идентификация выделенных культур проводилась на основании анализа гена 16S рРНК. Амплификацию генa 16S рРНК проводили универсальными бактериальными праймерамы 16SF (5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') и 16SR (5'-GAAAGGAGGTGATCCAGCC-3'). ПЦР продукты секвенированы в ABI PRISM капиллярном секвенаторе согласно протоколу ABI Prism BigDye Terminator Kit (Perkin Elmer). Полученная нуклеотидная последовательность была сравнена с последовательностями базы данных GenBank с применением BLAST анализа (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) [8]. Филогенетическое древо построено методом Neighbor-joining программы MEGA 6.06 [7; 13]. Результаты и обсуждение Подпись: Рис. 1. Клетки T. scotoductus Karvachar-1 под электронным микроскопомИз образца ила геотермального источника Карвачар (Нагорный Карабах) выделена аэробная грамотрицательная, аспорогенная, неподвижная, содержащая оксидазу и каталазу бактерия рода Thermus, образующая желтые колонии. Клетки изолята имеют вид длинных нитей, которые образуют филаменты (Рис. 1). Температурный диапазон роста культуры в пределах 40-80°C, с оптимумом при 65°C, а диапазон pH в пределах 6.0-10, с оптимумом при pH 7.5-8.0. Культура способна расти при высоких концентрациях NaCl (до 12%), однако оптимальная концентрация NaCl для роста составляет 2%. Выделенная культура обладает липолитической активностью, гидролизует казеин и крахмал, но не разжижает желатин. Культура резистентна к пенициллину и ампициллину, что не характерно для представителей рода Thermus [9]. Рис. 2. Филогенетическое древо близкородственных видов штамма T. scotoductus Karvachar-1. Масштаб (0.05) соответствует пяти нуклеотидным заменам на каждые 100 нуклеотидов. Цифрами показана статистическая достоверность порядка ветвления, определенная с помощью “bootstrap”-анализа 1000 альтернативных деревьев. Сравнение последовательности 16S рДНК исследуемой культуры с последовательностями GenBank показало большое сходство (99%) со штаммом Thermus scotoductus SA-01 (NR_074428), выделенным из грунтовых вод месторождения золота в Южной Африке. Филогенетическое древо, указывающее отношение выделеного штамма к близкородственным видам, приведено на рис. 2. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта CPEA-2011/10081 (Collaboration in environmental microbiology between Armenia and Norway).

Научные конференции

 

(c) Архив публикаций научного журнала. Полное или частичное копирование материалов сайта возможно только с письменного разрешения администрации, а также с указанием прямой активной ссылки на источник.