ВЛИЯНИЕ ПРИРОДНЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ ПЕПТИДОВ НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Максименя М.В.,Фефелова Е.В.,Быкова А.С.

Читинская государственная медицинская академия


Номер: 12-3
Год: 2016
Страницы: 97-100
Журнал: Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук

Ключевые слова

мононуклеары, пептиды, цитокины, mononuclear cells, peptides, cytokines

Просмотр статьи

⛔️ (обновите страницу, если статья не отобразилась)

Аннотация к статье

Проведен сравнительный анализ влияния пептидов синтетического и природного происхождения на продукцию цитокинов мононуклеарами клеток здоровых лиц. Выявлено, что при инкубации клеток с пептидными комплексами препаратов Эндолутена, Кристагена, Владоникса и Кортексина усиливается продукция IL-18. Под влиянием пептида Вилон ускоряется синтез TNFa. Пептиды препарата Эндолутен увеличивают продукцию IL-4. Пептиды тимуса Вилон и Владоникс, а также Эпиталон снижают продукцию IL-1 RA.

Текст научной статьи

В настоящее время выделено и синтезировано большое количество пептидов, обладающих биологической активностью. Комплексы полипептидов, получивших наименование цитомедины, являются важнейшими регуляторами обмена веществ [2, 353]. Установлено, что специфическая функция цитомединов, синтезирующихся в самых разных клетках, направлена на коррекцию метаболизма в том органе, где они образованы. В то же время неспецифические влияния цитомединов весьма многообразны и распространяются в том числе и на иммунитет [1, 4; 4,4]. За последние годы на основании изучения аминокислотного состава цитомединов тимуса, эпифиза и других эндокринных органов, методом синтеза получены олигопептиды, обладающие также плейотропностью действия и получившие наименование цитогены [2, 355]. Многочисленные исследования, проведенные в Санкт-Петербурском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, показали, что реуляторные пептиды при введении больным с различной патологией способны нивелировать вторичный иммунодефицит и восстанавливать баланс в содержании цитокинов [2, 354]. Кроме того изучалось эпигенетическое действие некоторых регуляторных пептидов на цитокиновый профиль [3, 56]. Однако изучение тонких механизмов действия биологически-активных молекул продолжается оставаться актуальным и на сегодняшний день. Целью работы явилось изучение влияния цитомединов и цитогенов на продукцию цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови здоровых доноров. Материалы и методы исследования. Исследование проведено на 15 относительно здоровых добровольцах, давших информированное согласие, согласно протоколам, утвержденным этическим комитетом ФГБОУ ВО ЧГМА. Средний возраст обследуемых составил 41,0 ±19,0 лет, 73 % из них мужчины. Кровь у доноров забирали из локтевой вены в вакутейнеры с гепарином. Мононуклеарные клетки выделяли центрифугированием на градиенте фикола Histopaque-1077 (Sigma). Мононуклеары отмывали и культивировали в среде DMEM c гентамицином (150 мкг/ мл) и с 10% инактивированной эмбриональной телячьей сывороткой. Для оценки синтеза цитокинов в культуральную среду, после внесения клеток добавляли растворы пептидов в концентрации 0,4 мкг/ мл. Исследования проводили с пептидами тимуса: использовали препарат Владоникс, являющийся комплексом природных пептидов тимуса, препарат Кристаген, являющийся комплексом синтетических пептидов тимуса и препарат Вилон, являющийся синтетическим дипептидом (Lys-Glu) тимуса; пептидами эпифиза: использовали препарат Эндолутен, являющийся комплексом природных пептидов эпифиза и Эпиталон - синтетический тетрапептид (Ala-Glu-Asp-Gly) эпифиза; а также исследовали препарат Кортексин - комплекс низкомолекулярных полипептидных фракций коры мозга. Все исследуемые пептиды были выделены либо синтезированы в лаборатории академика РАН В.Х.Хавинсона. В контрольный образец добавляли физиологический раствор в соответствующем объеме. Инкубация мононуклеаров осуществлялась в течение 24 часов при температуре 370С. После инкубации отбирали супернатант, клетки отмывали в 1 мл буфера, осаждали центрифугированием и замораживали в 0,1 мл фосфатного буфера. Содержание цитокинов TNFa, IL-18, IL-4 и IL-1 RA (рецепторный антагонист IL-1) определяли в супернатанте и в лизате клеток методом ИФА c помощью наборов реагентов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Статистический анализ полученных данных проводили с помощью программы Statistica 6.1 (StatSoft). Описательная статистика представлена медианой и межквартильным интервалом (25-го; 75-го перцентилей); для сравнения независимых выборок использовали критерий U-критерия Манна-Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали р <0,05. Результаты и обсуждение. Следует отметить, что в лизате клеток (табл. 1), под действием комплекса пептидов было зарегистрировано увеличении концентрации IL-18: на 66,69% (р=0.02) при инкубации с Эндолутеном, на 92,27% (р=0.004) - при действии Кристагена, на 66,79 (р<0.001) при действие Владоникса и на 53,66% (р=0.04) ) при добавлении Кортексина. При этом под влиянием синтетических пептидов Вилона и Эпиталона наблюдалась тенденция к снижению уровня цитокина. Являясь провоспалительным цитокином, для которого показана конститутивная экспрессия многими типами клеток, IL-18 обладает достаточно широким спектром биологических эффектов, влияет на секрецию различных по своей функциональной направленности медиаторов. Имеются данные, что IL-18 стимулирует продукцию и TNFa и IL-4 [5, 356]. Однако в нашем исследовании статистически значимый рост концентрации TNFa на фоне увеличения IL-18 не наблюдался. Межу тем отмечено, что при инкубации с Вилоном уровень TNFa возрос на 51,16% (р=0.045). Под действием Эндолутена наблюдалось увеличение IL-4 на 132,03% (р<0.001). В настоящее время IL-4, относящийся к противовоспалительным цитокинам, рассматривается как главный продукт субпопуляции Тh2-хелперов. Основная функция IL-4 -это контроль пролиферации, дифференцировки и функций В-лимфоцитов. Показано, что он подавляет продукцию TNFa. В нашем исследовании самая низкая концентрация TNFa, при действии Эндолутена, наблюдалась на фоне наиболее высокой - IL-4. Однако, данный цитокин способен усиливать аллергические реакции по I типу, стимулировать продукцию тучными клетками биологически активных веществ [7, 318; 8, 4186]. Было отмечено, что под действием пептидов, прежде всего тимуса произошло снижение продукции антагониста рецептора IL-1, специфически связывающего цитокиновые рецепторы: вилон уменьшил на - 22,42% (р=0.02), владоникс - на 27,99% (р=0.006), эпиталон снизил на - 16,87% (р=0.047) . Этот тип молекул продуцируется моноцитами, продуцирующими и IL-1 [6,1-2]. В супернатанте изменения в концентрациях цитокинов были менее выражены, хотя и имели туже направленность. Статистически значимым явилось лишь повышение концентрации IL-18 на 33,46% (р=0.02) при действии Эндолутена и TNFa на 41,13% (р=0.035) при действии Вилона. Следует отметить, что выраженность изменений продукции цитокинов под действием пептидных препаратов значительно варьировала у разных лиц. Выводы: Под действием пептидных комплексов препаратов Эндолутена, Кристагена, Владоникса и Кортексина усиливается продукция IL-18. Под влиянием дипептида Вилона ускоряется синтез TNFa. Пептиды препарата Эндолутен увеличивают продукцию IL-4. Пептиды тимуса Вилон и Владоникс, а также Эпиталон снижают продукцию антагониста рецептора IL-1. Пептиды синтетического и природного происхождения влияют на продукцию одних и тех же цитокинов мононуклеарами однонаправлено, но с разной степенью выраженности. Таблица 1 Влияние пептидов тимуса, эпифиза и коры мозга на продукцию цитокинов в суточной культуре мононуклеаров здоровых людей, (лизат клеток) Цитокины (пг/мл)\ Пептиды IL-18 (n=15) TNFa (n=15) IL-4 (n=15) IL-1RA (n=15) Контроль (физиологический раствор) 39,06 (30,60; 49,98) 598,05 (358,24; 1186,08) 12,24 (6,55; 18,07) 5228 (4651; 5775) Эпиталон (Ala-Glu-Asp-Gly) синтетический пептид эпифиза 30,62 (26,16; 34,86) 548,00 (410,68; 769,88) 9,50 (6,44; 17,22) 4346*¯ (3344; 4678,5) Эндолутен Пептиды Эпифиза 65,11* (47,76; 80,52) 429,02 (358,02; 765,58) 28,40* (22,36; 31,82) 4860 (4620; 5600) Вилон (Lys-Glu) Синтетический пептид тимуса 34,74 (21,71; 71,26) 904,04*(795,38; 1298,58) 9,96 (9,96; 21,12) 4056*¯ (2692; 5024) Кристаген Синтетический пептидный комплекс тимуса 75,10* (66,46; 70,62) 505,26 (442,06; 808,90) 20,47 (5,98; 27,36) 4772 (4462,5; 5547,5) Владоникс Пептиды тимуса 66,48* (65,15; 113,81) 706,54 (480,64; 860,08) 17,62 (11,28; 23,53) 3765*¯ (3266; 4583) Кортексин комплекс пептидных фракций коры мозга 60,02* (46,46; 69,92) 693,00 (472,14; 883,16) 15,04 (8,35; 19,89) 4921 (4591; 5670) Примечание: * - достоверные различия по сравнению с контролем

Научные конференции

 

(c) Архив публикаций научного журнала. Полное или частичное копирование материалов сайта возможно только с письменного разрешения администрации, а также с указанием прямой активной ссылки на источник.