РАЗВИТИЕ ЭМБРИОНОВ КУР И РЕЗУЛЬТАТИВНОСТЬ ПОЛУЧЕНИЯ ПТИЦЫ ПРИ ВВЕДЕНИИ ВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ В ЭМБРИОНЫ КУР IN VIVO Волкова Л.А.,Меннибаева Э.Р.,Ветох А.Н.,Волкова Н.А.,Зиновьева Н.А.

Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства имени академика Л.К. Эрнста


Номер: 9-1
Год: 2016
Страницы: 76-78
Журнал: Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук

Ключевые слова

куры, ретровирусные вектора, лентивирусные вектора, chicken, retroviral vectors, lentiviral vectors

Просмотр статьи

⛔️ (обновите страницу, если статья не отобразилась)

Аннотация к статье

В статье рассматривается эффективность развития эмбрионов кур и результативность получения птицы при использовании различных систем доставки генов, в частности, ретровирусных и лентивирусных векторов, в рамках разработки технологии получения генетически модифицированной птицы.

Текст научной статьи

Использование ретровирусных и лентивирусных векторов рассматривается как один из эффективных методов генетической модификации клеток кур. Данные типы векторов обладают природной способностью проникать и с высокой эффективностью интегрироваться в геном клетки-хозяина. Учитывая особенности развития и воспроизводства сельскохозяйственной птицы, в частности, развитие эмбрионов вне организма самки, использование данных систем доставки для трансгенеза сельскохозяйственнной птицы представляется более предпочтительным по сравнению с применением других методов введения рекомбинантной ДНК, в том числе микроинъекции. Возможность успешного использования ретровирусных и лентивирусных векторов для получения трансгенной птицы была продемонстрирована рядом исследователей [1, 646; 2, 935; 3, 89; 4, 728; 5, 353]. В этой связи, в рамках оценки эффективности использования данных векторов для генетической модификации кур актуальным является изучение влияние генно-инженерных манипуляций, проводимых с использованием вирусных векторов, на эмбриогенез кур и получение жизнеспособного потомства как одного из факторов, определяющих конечную результативность трансгенеза. Целью исследования было изучение влияния генно-инженерных манипуляций на развитие эмбрионов кур в рамках оптимизации условий введения генных конструкций в эмбрионы кур in vivo. Материал и методы исследований. Объектом исследования служили эмбрионы кур. Генно-инженерные манипуляции с эмбрионами осуществляли на 24 и 60 часы инкубации. В работе были использованы 2 ретровирусных и 2 лентивирусных вектора, содержащих, соответственно, промотор CVM (цитомегаловирус человека), либо промотор RSV (вирус саркомы Рауса). В качестве инъекционного раствора использовали вирусный препарат, который в объеме 1-2 мкл вводили непосредственно в эмбрион (на 24 часу инкубации) или дорсальную аорту эмбрионов (на 60 часу инкубации) с использованием капиллярной пипетки (Transferpettor. Eppendorf, Германия) через окно, вырезанное в тупом конце яйца. Инкубацию эмбрионов после генно-инженерных манипуляций проводили в инкубаторе в течение 21 суток при температуре 37,5°С. По окончании инкубации оставшиеся после вылупа молодняка яйца вскрывали с целью оценки развития эмбрионов. Результаты. Сравнительный анализ различных систем доставки генов, в частности, ретровирусных и лентивирусных векторов, не выявил существенных различий между экспериментальными группами по показателю развития эмбрионов, однако были установлены различия по показателю вывода молодняка (табл. 1). Наибольший процент цыплят был установлен при использовании лентивирусных векторов: данный показатель варьировал в зависимости от используемой генной конструкции от 20% до 25%, что было на 4-9% выше аналогичного показателя, полученного при введении ретровирусных векторов. Относительно высокий процент вылупа молодняка наблюдался также при использовании генных конструкций, содержащих промотор CVM, по сравнению с использованием промотора RSV: разница между экспериментальными группами по данному показателю составила 4-5%. Высокая эмбриональная смертность в опытных группах может быть связана, прежде всего, с интеграцией и экспрессией рекомбинантных генов. Развитие эмбрионов и результативность получения птицы в зависимости от способа введения генных конструкций в эмбрионы кур представлена в таблице 2. Высокий процент развития эмбрионов наблюдался при введении генных конструкций на 60 часу инкубации в дорсальную аорту эмбрионов - 67% при выводимости цыплят 32%, Данный показатель был, соответственно, на 6% и 7% выше аналогичных показателей, полученных при введении генных конструкций в эмбрионы на 24 часу инкубации контрольной группы, что связано, прежде всего, с используемыми методическими подходами по введению генных конструкций в эмбрионы кур на разных стадиях развития. Таблица 1 Развитие эмбрионов кур и результативность получения цыплят при проведении генно-инженерных манипуляций на эмбрионах с использованием разных типов вирусных векторов Показатели Группа I II III IV конт-роль Вирусный вектор ретровирусный вектор лентивирусный вектор - Генная конструкция pBMN-lacZ pХ-RSVhGh pWCAG pWRSV среда ДМЕМ Промотор1 CVM RSV CAG RSV - Интегрированный ген2 lacZ hGh GFP GFP - Объем ВП3, мкл 1-2 1-2 1-2 1-2 1-2 Сроки введения ВП3, час инкубации 24 24 24 24 24 Проколото эмбрионов, шт 50 50 53 50 50 Развилось эмбрионов, шт (%) 33 (66) 36 (68) 32 (61) 32 (64) 35 (70) Получено цыплят, шт (%) 10 (20) 8 (16) 13 (25) 10 (20) 26 (52) Примечание: 1 CVM -цитомегаловирус человека; RSV - вирус саркомы Рауса; CAG - гибридный промотор цитомегаловируса человека и β-актина птиц; 2 lacZ - β-галактозидаза, hGh - гормон роста человека, GFP - зеленый флюоресцирующий белок; 3 ВП - вирусный препарат. Таблица 2 Развитие эмбрионов кур и результативность получения цыплят в зависимости от способа введения лентивирусных векторов в эмбрионы in vivo Группа Генная конструкция Стадия введения, час инкуба-ции Проко-лото эмбрио-нов, шт Разви-лось эмбрио-нов, шт (%) Полу-чено цыплят, гол (%) I опытная pWCAG1 24 53 32 (61) 13 (25) II опытная pWCAG1 60 54 36 (67) 17 (32) Контроль 1 среда ДМЕМ 24 50 35 (70) 26 (52) Контроль 2 среда ДМЕМ 60 51 38 (75) 32 (63) Примечание: 1 под контролем промотора гена цитомегаловируса человека и промотора β-актина птиц; Таким образом, проведенные исследования показали влияние ряда факторов на эмбриогенез кур при проведении генно-инженерных манипуляций с эмбрионами in vivo. В частности, отмечено влияние на результативность генно-инженерных манипуляций типа генных конструкций, используемых для генетической модификации клеток-мишеней, а также способа введения генных конструкций в эмбрионы кур. Наименьшее влияние на эмбриогенез установлено при использовании лентивирусных векторов при их введении в дорсальную аорту эмбрионов кур на 60 час инкубации.

Научные конференции

 

(c) Архив публикаций научного журнала. Полное или частичное копирование материалов сайта возможно только с письменного разрешения администрации, а также с указанием прямой активной ссылки на источник.