ОЦЕНКА МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК ПОЧЕЧНЫХ КАНАЛЬЦЕВ КРОЛИКОВ ПОСЛЕ ЧАСТИЧНОЙ НЕФРЭКТОМИИ Сидельников А.И.

Ставропольский государственный аграрный университет


Номер: 7-4
Год: 2016
Страницы: 10-14
Журнал: Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук

Ключевые слова

кролики, почки, проксимальные канальца, дистальные канальца, ядерно-цитоплазматическое отношение, аллоплант, кетгут, rabbits, kidney, proximal tubule, distal tubule, nuclear-cytoplasmic ratio, Alloplant, catgut

Просмотр статьи

⛔️ (обновите страницу, если статья не отобразилась)

Аннотация к статье

В статье представлено сравнение параметров ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) в клетках проксимальных и дистальных канальцев почек кроликов после частичной нефрэктомии с применением кетгута и аллопланта. Проведено экспериментальное исследование на лабораторных животных. Установлено, что минимальное значение ЯЦО в проксимальных канальцах было на третьи сутки вдали от рубца при использовании кетгута (0.12±0.004), а максимальное - на шестидесятые сутки в зоне близкой к рубцу (0.26±0.006) в почках, где применяли кетгут. В дистальных канальцах минимальное значение данного параметра было на третьи сутки вдали от рубца при использовании кетгута (0.16±0.005), а максимальное - на восемнадцатые сутки в зоне близкой к рубцу (0.28±0.004) в почках, где применяли кетгут. Функциональная активность клеток проксимальных и дистальных канальцев почек кроликов, оцененная по параметрам ядерно-цитоплазматического отношения, изменяется волнообразно и зависит от срока после выполнения операции, применяемого для закрытия дефекта шовного материала (кетгут или аллоплант) и зоны повреждения органа (в зоне близкой к рубцу или вдали от нее).

Текст научной статьи

Введение В последние годы возрастает интерес ученых к изучению репаративных процессов в почках после хирургических вмешательств. Основой существования биологической системы является стабильность состава внутренней среды. Основную функцию по поддержанию гомеостаза и экскреции метаболитов выполняют почки [2, 4, 6, 12]. Важной составляющей живой клетки является ядро, оно выполняет комплекс общих функций по хранению генетической информации, ее воспроизведение и реализация - обеспечение синтеза белка [1, 7]. Разработка технологий адекватного заживления раны почки и восстановления ее целостности относятся к одной из сложных проблем регенеративной хирургии и урологии [8]. До настоящего времени не разработаны эффективные методы оптимизации заживления ран почки (послеоперационной, травматической и т. д.) [5, 10], восстановления ее паренхимы для обеспечения анатомической целостности почки и достижения гемостаза раневой поверхности [3, 5]. Цель исследования - изучить ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО) в клетках проксимальных и дистальных канальцев почек во взаимосвязи с использованием для ушивания раны почки различного шовного материала (нитей кетгута и аллопланта), при выполнении частичной нефрэктомии. Материал и методика Объектом исследования служили самцы кроликов породы шиншилла в возрасте 6-8 месяцев и массой тела 3-4 кг. В эксперименте было использовано 36 кроликов, разделенных на 2 группы по 18 животных. Проводили частичную нефрэктомию с ушиванием операционной раны в первой опытной группе кетгутом (HELM, Германия), во второй - аллоплантом (ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г. Уфа) и отбирали пробы для гистологического исследования. Для изучения микроморфометрических показателей элементов нефрона проводили эвтаназию кроликов в соответствии с Директивой 2010/63/EU ЕВРОПЕЙСКОГО ПАРЛАМЕНТА И СОВЕТА ЕВРОПЕЙСКОГО СОЮЗА по охране животных, используемых в научных целях, и проводили отбор тканей почек для гистологического исследования. Материал, взятый для гистологического исследования, фиксировали в 10%-ном водном растворе нейтрального формалина, проводили через спирты возрастающей крепости и ксилол, а затем заливали в гистологическую среду «Гистомикс» с использованием гистологического процессора замкнутого типа Tissue-Tek VIP™ 5 Jr. производства Sakura (Япония). Гистологические срезы для обзорных целей окрашивали гематоксилином и эозином согласно рекомендациям, изложенных в руководстве В.В. Семченко с соавторами [3]. Исследование гистологических срезов проводили с помощью светового микроскопа OLYMPUS-BX 43 (Япония) и фотоаппарата OLYMPUS С 300 (Япония). На каждом гистосрезе фотографировали 10 случайно выбранных полей зрения с использованием объективов 40х (для обзорных целей) и 100х (для морфометрических исследований). Ядерно-цитоплазматическое отношение клеток проксимальных и дистальных канальцев рассчитывали по формуле: ЯЦО=Sя/Sц, где: Sя - площадь ядра клетки; Sц - площадь цитоплазмы. Морфометрические исследования проводили с использованием программы VideoTesTMaster 4.0 для Windows. Анализ полученных числовых показателей проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа и критерия Ньюмена-Кейлса в программе PrimerofBiostatics 4-03 для Windows. Достоверными считали различия при p<0.05. Результаты исследований На фиксированных и окрашенных гистосрезах изучение ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) в почечных канальцах кроликов, проводили с учетом срока после выполнения операции, зависимости от применяемого для закрытия дефекта шовного материала (кетгут или аллоплант), зоны повреждения органа (в зоне близкой к рубцу или вдали от нее). В ходе исследования нами установлено, что ЯЦО в клетках проксимальных канальцев изменяется волнообразно (табл. 1, рис. 1). Рис.1. Почечные канальцы в зоне близкой к рубцу на восемнадцатые сутки при использовании аллопланта Окраска гематоксилином и эозином (х 400). Таблица 1 Ядерно-цитоплазматическое отношение в клетках проксимальных канальцев в почках кроликов после частичной нефрэктомии с применением кетгута и аллопланта Сроки исследования Кетгут, M±m Аллоплант, M±m В зоне рубца (n=300) Вдали от рубца (n=300) В зоне рубца (n=300) Вдали от рубца (n=300) Во время операции 0.15±0.003 0.15±0.003 3 сутки 0.16±0.004 0.12±0.004*& 0.19±0.004*# 0.16±0.003#& 6 сутки 0.16±0.005 0.14±0.003*& 0.17±0.004# 0.16±0.003#& 12 сутки 0.15±0.003* 0.13±0.002 0.20±0.005*# 0.17±0.003*#& 15 сутки 0.15±0.004 0.15±0.004* 0.16±0.004* 0.15±0.003* 18 сутки 0.22±0.006* 0.13±0.002*& 0.18±0.004*# 0.16±0.003#& 60 сутки 0.26±0.006* 0.19±0.004*& 0.20±0.005*# 0.17±0.003#& Примечание: статистическая значимость различий с более ранним сроком исследования: * - p<0.05; между одной и той же зоной при использовании разных шовных материалов одного срока исследования: # - p<0.05; между разными зонами при использовании одного шовного материала и одного срока исследования: & - p<0.05. Установлено, что при сравнении с более ранним сроком исследования, к третьим суткам ЯЦО в клетках проксимальных канальцев достоверно (p<0.05) увеличивается в почках ушитых аллоплантом на 21.05% в зоне близкой к рубцу и на 6.25% вдали от него, и при использовании кетгута достоверно (p<0.05) уменьшилось только вдали от рубца на 20%. К шестым суткам после проведения нефрэктомии ЯЦО достоверные (p<0.05) изменения отмечены лишь вдали от рубца при использовании кетгута - увеличение на 14.29%. На двенадцатые сутки ЯЦО в проксимальных канальцах достоверно (p<0.05) увеличилось в почках ушитых аллоплантом на 15% в зоне близкой к рубцу и на 5.88% вдали от него, а при использовании кетгута достоверно (p<0.05) уменьшилось только в зоне близкой к рубцу на 6.25%. К пятнадцатым суткам после операции отмечено достоверное (p<0.05) снижение значений данного параметра в почках ушитых аллоплантом на 20% в зоне близкой к рубцу и на 11.76% вдали от него, при этом в почках ушитых кетгутом - достоверное (p<0.05) повышение только вдали от рубца на 13.33%. На восемнадцатые сутки установлено достоверное (p<0.05) повышение ЯЦО при использовании аллопланта на 11.11% в зоне близкой к рубцу и на 6.25% вдали от него, а при использовании кетгута - достоверное (p<0.05) снижение на 13.33% вдали от рубца и повышение на 31.82% в зоне близкой к рубцу. С восемнадцатых по шестидесятые сутки значения данного параметра достоверно (p<0.05) повышаются в почках ушитых кетгутом на 15.38% в зоне близкой к рубцу и на 31.58% вдали от него, а при использовании аллопланта увеличились только в зоне близкой к рубцу на 10%. Сравнивая данные между зонами исследования, установлено, что после частичной нефрэктомии ЯЦО в проксимальных канальцах вдали от рубца достоверно (p<0.05) меньше на третьи и шестые сутки, как при использовании кетгута, так и аллапланта. На двенадцатые сутки достоверные (p<0.05) изменения данного параметра отмечены лишь при использовании аллопланта - вдали от рубца он ниже на 15%. На пятнадцатые сутки достоверных отличий не обнаружено. На восемнадцатые и шестидесятые сутки ЯЦО в проксимальных канальцах достоверно (p<0.05) ниже вдали от рубца как в почках ушитых кетгутом, так и аллоплантом. При сравнении одной и той же зоны исследования с использованием кетгута и аллопланта установлено, что с третьих по двенадцатые сутки ЯЦО в клетках проксимальных канальцев почек ушитых аллоплантом достоверно (p<0.05) больше как в зоне близкой к рубцу, так и вдали от него, по сравнению с кетгутом. На пятнадцатые сутки достоверных отличий не обнаружено. На восемнадцатые сутки в почках ушитых аллоплантом отмечено, что ЯЦО в зоне близкой к рубцу было достоверно (p<0.05) меньше на 18.18%, а вдали от рубца достоверно (p<0.05) больше на 18.75%, по сравнению с этими же зонами в почках, где применяли кетгут. На шестидесятые сутки значение данного параметра было достоверно (p<0.05) меньше в почках ушитых аллоплантом, как в зоне близкой к рубцу (на 23.08%), так и вдали от него (на 10.53%). При анализе ЯЦО в клетках дистальных канальцев почек (табл. 2) установлено, что при сравнении с более ранним сроком исследования к третьим суткам достоверное (p<0.05) изменение было только в зоне близкой к рубцу при использовании кетгута - больше на 10%. На шестые сутки отмечено достоверное (p<0.05) повышение данного параметра только при использовании кетгута, как в зоне близкой к рубцу (на 9.09%), так вдали от него (на 20%). На двенадцатые сутки достоверных изменений ЯЦО не выявлено. С двенадцатых по восемнадцатые сутки отмечено достоверное (p<0.05) понижение данного параметра в дистальных канальцах при использовании кетгута на 18.18% в зоне близкой к рубцу и на 10.53% вдали от него, а при использовании аллопланта - только в зоне близкой к рубцу на 18.18%. К восемнадцатым суткам, по сравнению с пятнадцатыми, достоверное (p<0.05) изменение отмечено лишь в зоне близкой к рубцу в почках ушитых аллоплантом - снижение ЯЦО на 35.71%. К шестидесятым суткам значение данного параметра в клетках дистальных канальцев почек ушитых кетгутом достоверно (p<0.05) понижается в зоне близкой к рубцу на 17.86% и повышается на 19.05% вдали от него, а при использовании аллопланта достоверно (p<0.05) повышается только в зоне близкой к рубцу на 14.29%. Таблица 2 Ядерно-цитоплазматическое отношение в клетках дистальных канальцев в почках кроликов после частичной нефрэктомии с применением кетгута и аллопланта Сроки исследования Кетгут, M±m Аллоплант, M±m В зоне рубца (n=300) Вдали от рубца (n=300) В зоне рубца (n=300) Вдали от рубца (n=300) Во время операции 0.18±0.004 0.18±0.004 3 сутки 0.20±0.005* 0.16±0.005& 0.20±0.004 0.20±0.004# 6 сутки 0.22±0.007* 0.20±0.005*& 0.21±0.005 0.19±0.004#& 12 сутки 0.22±0.003 0.19±0.003& 0.22±0.006 0.18±0.004& 15 сутки 0.18±0.005* 0.17±0.004* 0.18±0.004* 0.19±0.004 18 сутки 0.28±0.004* 0.17±0.003& 0.18±0.004# 0.19±0.004 60 сутки 0.23±0.005* 0.21±0.004*& 0.21±0.004*# 0.20±0.003 Примечание: статистическая значимость различий с более ранним сроком исследования: * - p<0.05; между одной и той же зоной при использовании разных шовных материалов одного срока исследования: # - p<0.05; между разными зонами при использовании одного шовного материала и одного срока исследования: & - p<0.05. Сравнивая данные между зонами исследования, установлено, что ЯЦО в клетках дистальных канальцев почек ушитых кетгутом достоверно (p<0.05) меньше вдали от рубца с третьих по двенадцатые и с восемнадцатых по шестидесятые сутки, а при использовании аллопланта только на шестые и двенадцатые сутки. При сравнении одной и той же зоны исследования с использованием кетгута и аллопланта установлено, что на третьи сутки ЯЦО в клетках дистальных канальцев почек ушитых аллоплантом достоверно (p<0.05) выше вдали от рубца на 20%, по сравнению с кетгутом. На шестые сутки значение данного параметра при использовании аллопланта достоверно (p<0.05) меньше на 5% вдали от рубца, по сравнению с этой же зоной, где применяли кетгут. На двенадцатые и пятнадцатые сутки достоверных отличий ЯЦО обнаружено не было. На восемнадцатые и шестидесятые сутки данный параметр в почках ушитых аллоплантом достоверно (p<0.05) меньше только в зоне близкой к рубцу на 35.71% и 8.7%. Таким образом, установлено, что минимальное значение ЯЦО в проксимальных канальцах было на третьи сутки вдали от рубца при использовании кетгута (0.12±0.004), а максимальное - на шестидесятые сутки в зоне близкой к рубцу (0.26±0.006) в почках, где применяли кетгут. В дистальных канальцах минимальное значение данного параметра было на третьи сутки вдали от рубца при использовании кетгута (0.16±0.005), а максимальное - на восемнадцатые сутки в зоне близкой к рубцу (0.28±0.004) в почках, где применяли кетгут. Выводы Вариации функционального состояния клетки затрагивают клеточный метаболизм: наступают изменения белкового синтеза, а также изменения в депонировании, выработке или выведении разнообразных метаболитов. В результате различных функциональных состояний клетки изменяется ее ядерно-цитоплазматическое отношение. Следовательно, по параметрам ЯЦО принято судить о метаболической активности клетки [11]. Функциональная активность клеток проксимальных и дистальных канальцев почек кроликов, оцененная по параметрам ядерно-цитоплазматического отношения, изменяется волнообразно и зависит от срока после выполнения операции, применяемого для закрытия дефекта шовного материала (кетгут или аллоплант) и зоны повреждения органа (в зоне близкой к рубцу или вдали от нее). Причиной увеличения ядерно-цитоплазматического отношения может явиться как усиление функциональной активности клетки, так и полиплоидизация в результате активации при повреждении таких форм деления, как амитоз и эндомитоз, которые характерны для почек [9].

Научные конференции

 

(c) Архив публикаций научного журнала. Полное или частичное копирование материалов сайта возможно только с письменного разрешения администрации, а также с указанием прямой активной ссылки на источник.